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    实验室检查
    来源:本站原创 时间:2014-4-21 17:12:32 点击量:
     
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    一、结核菌:结核菌,又称结核分枝杆菌,属于厚壁菌门,裂殖菌纲、放线菌臣,分枝杆菌科、分枝杆菌属。它是1882年由德国学者koch发现的分枝杆菌,有氧繁殖,是具有致病能力的抗酸杆菌。
    1、结核菌的形态与结构
    结核杆菌的正常形态为笔直或稍有弯曲,两段呈钝圆,长1~4μm,宽0.3~0.5μm的细长杆菌。结核菌无芽孢,无荚膜,无鞭毛,自身不能运动,生长发育期形成分枝,在痰中多为单个存在,有时呈v、y、人字形排列,也可呈束状或互相聚集成团。结核菌在生长初期与衰弱期因受不良条件的影响,如物理因素、化学因素、特别是药物因素,而呈现异常变化,表现为放射状、哑铃状、丝状、串珠状、或球形颗粒等多种形态。电子显微镜下观察可见其多形性形态和微细结构。结核菌的细胞质被两层薄膜包绕,其外层比较厚叫细胞壁,它决定着结核菌的特征,内层为柔软、富有弹性、半透明的细胞膜。在菌体中心,有微细的DNA纤维,它相当于具有遗传情报的核质,但无胞膜。在细胞质内,可见到大小不同,多少不等的颗粒,在近细胞膜处还有中介体,为菌体分裂时细胞膜卷进细胞质内而形成。
    2、结核菌的抗酸性
    结核菌为无色微生物,必须经过生物学染色方法,方能在显微镜下观察和确认。一般染色方法对结核分枝杆菌不易着色,须在染色液中加石炭酸类媒染剂,经加温或延长染色时间才能着色,一经着色,不易被稀盐酸乙醇或煮沸法所脱色,而其他细菌或细胞均可被脱色,所以把不被盐酸乙醇脱色的细菌称为抗酸菌。结核菌、麻风菌,其他分枝杆菌均具有此特性,故称为抗酸杆菌。抗酸染色法可以把临床标本涂片区分为分枝杆菌和非分枝杆菌,使细菌得到初步鉴定。抗酸染色法的原理可能与结核菌的细胞壁中含有较高量的类脂质有关。
    3、结核菌的化学成分与生物活性
    (1)类脂质:类脂质是结核分枝杆菌菌体成分具有生物活性的物质,其含量是细菌中最高的,可达60%,以细胞壁内含量最多。它分为单纯类脂(蜡和中性脂)、复合类脂(磷脂,含有脂肪酸、磷、甘油和基脂)和脂肪酸(软脂、油脂、亚麻酸、蜡酸、结核菌酸等)。类脂质不仅可保护细菌不被吞噬细胞吞噬消化,而且能对抗化学药物,还能刺激单核细胞转为类上皮细胞和郎罕巨细胞,形成结核结节。磷脂刺激机体大单核细胞增生并能增强菌体蛋白的致敏作用。脂肪酸与结核菌毒力有关,对胰蛋白酶及白细胞蛋白酶有抵抗作用,形成干酪物质。结核菌酸使结核菌具有抗酸性。类脂质还可使结核菌呈现疏水性和细菌间具有粘着性的特性,用于分枝杆菌与非分枝杆菌的初步鉴定。
    (2)菌体蛋白:结核菌含有多种蛋白质,其中主要是核蛋白,以细胞壁含量最多,以结合形式存在于菌细胞内,是完全抗原。结核菌素是结核菌培养时的代谢产物,主要成分是蛋白质和多肽类物质,可使机体组织引起渗出性反应,使机体产生变态反应。
    (3)多糖:多糖可单独存在,或与蛋白质、类脂质结合存在,由阿糖半乳聚糖、阿糖甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖组成,无结核菌素样活性,是免疫反应的抗原物质,能引起免疫血清沉淀反应,形成抗体。
    (4)核酸:核酸分核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA),RNA分布于细胞内,DNA存在于核纤维中。核酸参与细胞合成蛋白质,在细胞生物学上具有重要意义。有报告说核酸对血中抗体和免疫细胞的产生具有强佐剂活性。
    (5)盐类:结核菌含钙、钾、镁、铁、磷等,约占菌体成份的百分之六。
    4、结核菌的生长特性与变异
    结核菌在非动物体内不能繁殖,在培养基中生长发育缓慢。生长适宜温度为37℃,在富有氧的环境中生长良好,若还有2.5%~10%二氧化碳则生长更快,在低氧环境中也能生存,其适宜pH值为6.5~6.8的中性环境,所需营养成分大多能自行合成。结核菌的增殖方式是单个细菌向两端伸长而后从中间横分裂为二,再各自伸长再分裂为四。结核菌与普通细菌比较生长缓慢,在良好的培养条件下,分裂增殖一次需10~15个小时,而大肠杆菌只需要17~20分钟。已分裂的结核菌相互间有粘着性质,故增殖型结核菌,常呈束状或索状。一般选用含甘油的鸡蛋培养基,从单个结核菌接种于培养基到出现菌落,在流体培养基上需2~4周,在固体培养基上需6~8周。结核菌的典型菌落呈R型,有时呈S型。
    结核菌在不良环境因素的影响下,可发生菌落变异、毒力变异及耐药性变异。菌落变异可由粗糙型变为光滑型。接触某些抗结核药物如异烟肼可使抗酸菌减弱或消失。人工培养下多次传代,则毒力减弱以至于丧失致病力,BCG(卡介苗)即为此变异的典型例证,它是将有毒的牛型结核菌接种于含甘油、胆汁、马铃薯培养基上,经十三年传种230代后获得的毒力减弱而保留抗原性的变异株,接种动物,不致病而可获得免疫力,1921年应用于人类预防接种。结核菌耐药性的产生也是一种变异。
    5、结核菌的抵抗力与毒力
    结核菌因细胞壁含大量的类脂质,使其具有疏水性,故对消毒剂,湿热、干燥等耐受力比其它细菌强。
    (1)物理因素:结核菌在室温和阴暗处的干燥痰内,可存活6~8个月,在飞扬的空气尘埃中可存活8~10个月。在直射阳光下2小时杀死,紫外线照射只需10~20分钟即可杀死。结核菌对低温抵抗力强,-269℃~-262℃能生存数月。干热对结核菌杀伤力弱,痰内结核菌在100℃下需4~5分钟被杀死。湿热对结核菌杀伤力强,在60℃30分钟、70℃10分钟、80℃5分钟、90℃1分钟即可将其杀死,所以煮沸消毒与高压消毒是最有效的消毒法。
    (2)化学因素:酒精能凝固蛋白质,使痰表面形成膜把结核菌包裹起来,故不宜用于痰的消毒。结核菌经2%石炭酸液处理5分钟,5%石炭酸液处理1分钟均可杀死,但对痰的消毒效果也较差。1%煤酚皂溶液处理细菌45分钟,2%煤酚皂溶液处理细菌10分钟,5%煤酚皂溶液处理细菌5分钟,均可以达到杀死结核菌的效果。应用5%~10%煤酚皂溶液与痰液等量混合后处理1~2小时,才能杀死结核菌。0.5%84消毒液15分钟可杀死结核菌,结核菌对酸、碱抵抗力强。
    (3)毒力:毒力是细菌个体表现的致病程度。结核菌不像普通细菌能产生内毒素和外毒素,也无荚膜和细胞外侵袭酶类。其毒力致病性主要是其在机体中细胞内、外生长与大量繁殖,机体对菌体成分与其代谢产物引起免疫损伤以及变态反应导致一系列组织学上的变化有关。其毒性物质主要是索状因子和硫酯。结核菌的毒力与宿主和寄生物之间的许多因素有关,如动物种属、个体差异、细菌的多少和机体免疫力等。毒力具有不稳定性,传代可发生变化,可使毒力降低或消失。
    6、结核菌的耐药性
    耐药性是指微生物对药物抵抗性增强的一种变异现象。结核菌无论在机体内,还是在试管内均能产生耐药性,而且可以传代。耐药性成为现代化疗取得应有成效的重要障碍。产生耐药的机制有以下几种:1、选择性突变学说;2、适应性耐药;3、耐药因子;4、交叉耐药。总之,结核菌的耐药性尚有待进一步研究,以便从理论上阐明,指导临床化疗,加速结核病的控制。
    二、实验室检查:
    现代临床实验室检查方法日趋完整而复杂,有许多方法都具有重要的诊断意义。有关感染性疾病的检查:外周血象、尿常规、血培养、血沉、胸部X线、B超、结核菌素皮试等。有关非感染性疾病检查:恶性肿瘤应作胸腹部、骨骼X片,发现病变部位及深部肿大的淋巴结,骨髓穿刺,外周血象检查等。
    1、常规检查(1)血象:结核病患者血象通常无改变。在结核病的急性进展期可略有增高,并呈核左移现象。有些严重结核病患者可出现继发性贫血。(2)血沉:活动性肺结核患者血沉通常增快,但无特异性诊断价值。定期检查血沉,可看出疾病发展趋势,可作为判断疾病活动性的指标。原血沉快的患者,血沉下降表明病情好转,血沉上升表明病情恶化。(3)生化检查:有些病人,特别是应用抗结核药物的病人,常有肝功能损害,偶有电解质异常。
    2、细菌学检查:结核菌是结核病的病原菌,结核病细菌学检查是确诊结核病的特异性方法,是结核病诊断,发现传染源、判定化疗效果及监测结核病疫情的重要手段。肺结核病人标本主要是痰,检查的常用方法有抗酸杆菌涂片检查、分枝杆菌培养、分枝杆菌菌种鉴定、药物敏感性试验等。无空洞肺结核患者痰涂片阳性率低于40%,空洞性患者痰涂片阳性率为70%~85%。肺结核病人痰培养阳性率为65%~95%。淋巴结核病人可作淋巴结穿刺取内容物或脓计,作涂片或培养查结核杆菌。
    3.免疫学(血清学)检查:目前多用酶联免疫吸附试验(ELISA):是测定结核菌的抗体,方法是测定吸附于一种固体吸附剂的抗原抗体结合量,以光密度和稀释度终点法表示结果。另外还有可溶性抗原荧光抗体试验(SAFA)、循环免疫复合物(CIC)等。
    4.活检:病理活体组织检查在淋巴结结核的诊断、鉴别诊断中具有重要地位,阳性率可达90%以上,切片可出现干酪样病变,上皮样细胞和排列不规则的郎罕巨细胞。并且还能通过对所获组织进行病理组织学分型和细菌微生物检查。取样方法为针吸或切除病变组织。
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